培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品：

0.375ng/ml大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試盒Blasticidin (solution)

0.188ng/ml大鼠管舒緩激肽(BK)ELISA試盒Zeocin™ (solution)

46.9pg/ml大鼠骨特性性酶B(ALP-B)ELISA試盒Blasticidin (solution)

0.375mIU/ml大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試盒HEK-Blue™ CLR Selection

0.188ng/ml大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試盒HEK-Blue™ Selection

0.094ng/ml大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試盒Hygromycin B Gold (solution)

0.094ng/ml大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試盒Puromycin (solution)

0.094ng/ml大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試盒Zeocin™ (powder)

0.094ng/ml大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試盒Phleomycin (powder)

0.188ng/ml大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試盒G418 (solution)
人輸尿管上皮細胞過氧化物酶體增殖物激活受體δ(PPARδ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)D-去腎上腺素酒石鹽

組蛋白脫?；?(HDAC1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)N-芐氧羰基-6-氨基己

狀旁腺素受體1(PTHR1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)N-(+)-生物素基-6-氨基己

輕肽鐵蛋白(FTL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)維生素E

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)D-α-生育酚琥珀鹽

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(+)-α-生育酚醋鹽

饑餓素/肥胖抑制素前激素原(GHRL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)ent-那格列奈

20S-蛋白酶體(20S-PSM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)ent-那格列奈酰基-β-D-葡萄糖苷

20S-蛋白酶體(20S-PSM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)那格列奈?；?β-D-葡萄糖苷

蛋白酶體亞基α1(PSMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)脫[1-(4,4-二氟代環(huán)己酰胺)-1-苯基]-3-羥基馬拉維若

肌球蛋白重鏈4(MYH4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4-羥苯基馬拉維若

肌球蛋白重鏈7(MYH7)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)依澤替米貝

肌球蛋白重鏈6(MYH6)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)3-O-酰依澤替米貝

5-羥色胺受體2A(HTR2A)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)依澤替米貝羥基β-D-葡萄糖苷

90kDa熱休克蛋白αB1(HSP90αB1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)依澤替米貝β-D-葡萄糖苷